什么是外泌体

简单介绍?下细胞外囊泡（Extracellular Vesicles， EVs）。细胞外囊泡是细胞以多种形式分泌到细胞外的各种囊泡：

其主要分为外泌体（Exosomes）直径为30-150nm，以内吞的形式释放到细胞外；微囊泡（Microvesicles）直径为100-1000nm，以出芽的形式释放到细胞外；凋亡?体（Apoptotic body）直径为50-2000nm，由凋亡细胞产?。

生理功能：

外泌体是细胞与细胞间通讯中起关键作?的胞外基质成分，?泛参与细胞间物质运输与信息传递，调控细胞?理活动；同时，外泌体具有抗原提呈、免疫逃逸等免疫调节作?和诱导正常细胞转化，促进肿瘤发?及转移的作?；此外，外泌体还可以作为“天然的纳?粒?"来进?药物递送，装载的药物类型包括?分?化学药物、蛋?质和肽、核酸药物等。

样本来源：

目前外泌体研究的样本主要是以细胞培养上清以及各种体液为主，包括血液、淋巴液、唾液、尿液、精液、乳汁等。

分离手段：

外泌体分离的方式方法有很多很多种，这边就比较其相对的优劣势进行简单的比较：

1.差速超速离?：差速超速离?是?家最熟悉的?种分离?法，?献中?得最多的且也是?前?较能受到认可的?法。差速超速离?是先通过低速离?去除细胞和细胞凋亡碎?，再通过超?速去除?囊泡和沉淀外泌体。此?法分离得到的外泌体可?于后续的鉴定实验、分?检测实验、细胞实验和动物实验。

2.密度梯度离?：此?法多指蔗糖密度梯度超速离?。此?法从不同密度的颗粒中分离出囊泡，对离?的时间?较敏感。如果外泌体和颗粒密度相似，外泌体可能会被其他颗粒污染。

3.超滤：超滤过程中需要?超滤膜进?外泌体隔离。在分离过程中，外泌体可能会阻塞过滤孔，导致膜的寿命减短，分离效率较低。同时，外泌体会粘附在膜上，导致产量降低。

4.免疫磁珠法：?包被抗标记物抗体的磁珠与外泌体囊泡孵育后结合，即可将外泌体吸附并分离出来。该?法分离得到的外泌体的?物活性易受pH和盐浓度影响，不利于下游实验。

5.试剂盒分离法：?前商业化的外泌体提取试剂盒多种多样，提取效果良莠不齐。同时试剂盒本?的价格?较?，且外泌体的得率和纯度?般，不是性价??的?种分离?法。

外泌体的鉴定：

外泌体分离之后，需要经过?系列鉴定才能确定分离的是外泌体。。下?介绍?种鉴定?法：

1.透射电镜鉴定法：透射电镜，全称为透射电?显微镜（Transmission Electron Microscope，简称TEM），分辨率为0.1~0.2nm，适合外泌体双层囊膜超微结构观察，?于鉴定样本中是否存在外泌体样结构，即通常为茶托型或?侧凹陷的半球形。

2.浓度粒径检测法：纳?颗粒跟踪分析法，简称NTA（Nanoparticle Tracking Analysis），该技术已被外泌体研究领域认可为外泌体表征?段之?。NTA技术的样本处理简单、能保证外泌体原始状态、检测速度快，检测后能提供外泌体粒径和浓度信息。

3.Western Blot分?标志物检测： WB可以?来鉴定外泌体的标志蛋?是否存在于样本中。外泌体标志蛋?包括四跨膜蛋?家族，如CD9、CD63和CD81；细胞质蛋?，如肌动蛋?（Actin）和钙磷脂结合蛋?（Annexins）；参与?物功能的分?，如凋亡转接基因2互作蛋?X（ALIX）、肿瘤易感基因101蛋?（TSG101）、热休克蛋?（HSP70、HSP90），以及细胞分泌的特异性蛋?。

4.流式细胞术检测：外泌体可以先进?荧光标记，再通过流式细胞仪检测外泌体表?标记蛋?。但是传统的流式细胞仪检测样本的颗粒??是300-500nm，?外泌体直接都在300nm以下，因此，可能?量的外泌体检测不到，造成分析不太准确。

5.ELISA检测：根据外泌体的表?标志物，如CD9、CD63进?ELISA实验，来检测外泌体的蛋?量，从?实现对外泌体的分析。但是ELISA?法容易受其他抗原的?扰，引起实验结果出现偏差。

外泌体提取下游实验：

1.外泌体microRNA测序/芯?：通过对外泌体microRNA的?通量分析，可以找到不同外泌体之间差异表达的microRNA，为后续的功能学实验做准备。

2.外泌体mRNA测序/芯?：通过对外泌体转录组测序或表达谱芯?分析，可以找出不同外泌体之间差异表达的mRNA，从?发现外泌体中哪些基因发?了变化。

3.外泌体lncRNA芯?：通过lncRNA芯?可以同时得到lncRNA和mRNA数据，为研究者提供更完整的lncRNA和mRNA筛查。

4.外泌体ceRNA芯?：竞争性内源RNA（competing endogenous RNA，ceRNA）机制如下：microRNA（miRNA）处在调控?络的中?，lncRNA分?富含miRNA结合位点，可以竞争性地结合miRNA，解除miRNA对其靶基因的抑制作?，进?调控基因的表达?平。通过ceRNA芯?可以为研究者提供完整的lncRNA，circRNA和mRNA筛查。

5.外泌体蛋?质组学：主要包括iTRAQ蛋?质组定量/TMT标记定量蛋?质组学/label free蛋?质组定量。通过蛋?质组学分析，寻找差异表达蛋?，并揭?其细胞?理病理功能。

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